出品公司:	Invitrogen
細(xì)胞名稱:	SF9, SF9昆蟲細(xì)胞, 昆蟲卵巢細(xì)胞, sf9細(xì)胞
細(xì)胞類型:	昆蟲細(xì)胞
產(chǎn)品目錄號:	11496015/ B82501/ 12659017
培養(yǎng)基:	Sf-900 II SFM/ Sf-900 III SFM/ Grace's Insect Medium
生長條件:	28 ℃,  有氧，不需要二氧化碳
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化條件:	病毒感染
應(yīng)用:	用于桿狀病毒增殖和重組蛋白表達(dá)
誘導(dǎo)方法:	桿狀病毒誘導(dǎo)
細(xì)胞特點(diǎn):	Sf9 細(xì)胞是克隆分離物，來自于草地貪夜蛾 (Spodoptera frugiperda ) (Fall Armyworm) IPLB-Sf21-AE 細(xì)胞，可用于瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)重組蛋白。 Sf9 是經(jīng)過馴化的細(xì)胞，可用于 Sf-900 II SFM 中的無血清懸浮培養(yǎng)，因此可以節(jié)約無血清和/或懸浮培養(yǎng)馴化所需的時(shí)間和成本 (1,2)。 過去，昆蟲細(xì)胞在靜態(tài)系統(tǒng)中進(jìn)行培養(yǎng)，使用 T 形瓶和添加血清的基本培養(yǎng)基 (3)。 昆蟲細(xì)胞一般無需貼壁，我們建議在懸浮培養(yǎng)中維持 Sf9 接種儲液，使其更靈活，更易于使用。 使用有譜系記錄的低傳代細(xì)胞制成（傳代總次數(shù)為 45 至 50 代，無血清傳代 15 至 20 次）。   以含有 7.5% DMSO 的 Sf-900 II SFM 冷凍儲液提供。   細(xì)胞總數(shù) 1.5 x 107。   可以解凍并直接在懸浮培養(yǎng)物中使用，快速擴(kuò)增細(xì)胞儲液，增殖桿狀病毒儲液和生產(chǎn)重組蛋白，或者在轉(zhuǎn)染或噬菌斑分析應(yīng)用中用作單層。

SF9昆蟲細(xì)胞特點(diǎn)和簡介

該細(xì)胞系源于雌性草地貪夜蛾蛹的卵巢組織，可以用于復(fù)制桿狀病毒表達(dá)載體。

SF9細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

SF9昆蟲卵巢細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將sf9細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

SF9細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時(shí)和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。