產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
Drosophila+S2
詳情介紹：
果蠅胚胎細胞昆蟲細胞產(chǎn)品基本信息
| 細胞名稱: |
S2 (Schneider 2), Drosophila S2 Cells Drosophila S2細胞，S2細胞，S2果蠅胚胎細胞, S2果蠅細胞，S2昆蟲細胞 |
|---|---|
| 出品公司： | Thermofisher |
| 產(chǎn)品貨號： | R69007，R690-07 |
| 種屬來源: | 果蠅 |
| 組織來源: | 胚胎 |
| 細胞形態(tài): | 上皮細胞樣 |
| 生長特性: | 懸浮貼壁混合生長 |
| 培養(yǎng)基: |
Schneider's Drosophila medium +10% 熱滅活胎牛血清 |
| 生長條件: |
溫度：26-28度 氣相：空氣，不需要二氧化碳。 |
| 傳代方法: | 1：2至1：6，每周2次。 |
| 凍存條件: |
45% 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）+45% 新鮮完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）中含有S2果蠅細胞的生長因子，有助于S2細胞的生長。 |
| 支原體檢測: | 陰性 |
| 應(yīng)用: | 該細胞可以作為轉(zhuǎn)染宿主細胞。 |
| 細胞鑒定: |
免疫組化顯示波形蛋白(Vimentin)抗體陰性；結(jié)蛋白(Desmin)抗體陽性。
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| 細胞說明： |
1、細胞培養(yǎng)條件是26°C–28°C，空氣中即可，不用二氧化碳。在培養(yǎng)皿中是半貼壁細胞，在搖瓶中是懸浮細胞。 2、S2果蠅細胞的完全培養(yǎng)基是： Schneider's Drosophila medium + 10% 熱滅活胎牛血清+ 0.1% Pluronic F-68. 這個完全細胞培養(yǎng)基在瞬時表達和穩(wěn)表達細胞系構(gòu)建的時候，都可以使用。 Pluronic F-68在懸浮培養(yǎng)的時候需要加入，但是在貼壁培養(yǎng)的時候不用添加。 可以選擇性的加入終濃度為50 單位/ml的青霉素和50 ug/ml的鏈霉素。 細胞轉(zhuǎn)染和凍存的時候，需要確保細胞的活力大于95%. 3、S2果蠅細胞培養(yǎng)時倍增的時間是24小時，細胞進行傳代的時候*好是在細胞對數(shù)生長期。 4、S2果蠅胚胎細胞的凍存條件是： 45% 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）+45% 新鮮完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存。 用過的完全培養(yǎng)基（條件培養(yǎng)基）中含有S2果蠅細胞的生長因子，有助于S2細胞的生長，所以一定要保留一點用過的培養(yǎng)基在里面。 5、培養(yǎng)S2細胞的時候，如果使用未滅活的胎牛血清，會抑制S2細胞的生長。 6、果蠅Schneider 2（s2）細胞可以轉(zhuǎn)染表達載體用于蛋白瞬時表達或共轉(zhuǎn)染一個篩選載體（例如pcohygro或pcoblast）構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系。我們建議你測試一下你的蛋白的瞬時表達情況，然后再構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系。一旦你證明你的蛋白質(zhì)在s2細胞中表達，你可以構(gòu)建穩(wěn)表達細胞株，增加蛋白表達，擴大蛋白表達的生產(chǎn)規(guī)模。果蠅S2穩(wěn)表達細胞系通常包含多拷貝基因插入，形成500多個-1000個拷貝數(shù)，首尾相接，插入的基因拷貝數(shù)可以通過改變表達質(zhì)粒和選擇質(zhì)粒的比例來控制。我們建議使用表達質(zhì)粒與選擇質(zhì)粒比例是的19:1（w/w）。你可以改變比率以優(yōu)化特定基因的表達。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染建議使用磷酸鈣，但一些脂基轉(zhuǎn)染試劑，例如Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑同樣適用。 7、果蠅表達系統(tǒng)的篩選載體是pCoHygro載體和pCoBlast載體，他們分別含有潮霉素（Hygromycin）和殺稻瘟菌素（Blasticidin）篩選抗性。在這兩個載體中，抗性基因都是在Copia啟動子的作用下調(diào)控的。 8、構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系時，使用pCoHygro篩選質(zhì)粒和表達質(zhì)粒一起共轉(zhuǎn)染S2果蠅細胞的時候，潮霉素的篩選濃度是300ug/ml, 一般要篩選3-4個星期。使用使用pCoBlast篩選質(zhì)粒和表達質(zhì)粒一起共轉(zhuǎn)染S2果蠅細胞構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系的時候，殺稻瘟菌素的篩選濃度是25 ug/ml, 一般要篩選2個星期就可以了。在篩選過程中，細胞死亡會經(jīng)常發(fā)生。 Gibco果蠅s2細胞用于果蠅表達系統(tǒng)（DrosophilaM Expression System， DES）中異源蛋白的表達。S2細胞系來源于黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）胚胎后期細胞（20-24小時）的原代培養(yǎng)。s2細胞系的許多特征表明它來源于巨噬細胞樣細胞系。s2細胞在室溫下二氧化碳濃度條件下就可以生長，在培養(yǎng)皿中呈松散的半粘附單層，在搖瓶中呈懸浮細胞狀態(tài)。 果蠅S2細胞特征如下：
•可以用于蛋白質(zhì)的瞬時表達或用于構(gòu)建穩(wěn)定表達的細胞系。
•用于蛋白表達的質(zhì)量和性能測試，用于質(zhì)控。
1、用于蛋白質(zhì)的瞬時表達或構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系
果蠅s2細胞可單獨用重組表達載體進行瞬時表達研究，或使用載體（如pcohygro或pcoblast）以構(gòu)建穩(wěn)表達細胞系。有多種果蠅表達系統(tǒng)試劑盒可用于在S2細胞中表達感興趣的重組蛋白。
2、細胞株質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
每批S2細胞都經(jīng)過冷凍后細胞生長和活力測試。此外，還對S2細胞株進行了細菌、酵母菌、支原體和病毒污染檢測，并對其進行了同工酶和核型分析。
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| S2細胞圖片： |
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S2果蠅胚胎細胞接受后處理
1) 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
S2果蠅胚胎細胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
S2果蠅胚胎細胞培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
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果蠅胚胎細胞昆蟲細胞產(chǎn)品應(yīng)用舉例
pCMV-DsRed-Express2
2015-08-16pEF1α-IRES-DsRed-Express2
2015-07-31pEF1α-DsRed-Express2
2015-07-30pDsRed-Express2-N1
2015-07-30pDsRed-Express2-C1
2015-07-30pIRES2-ZsGreen1
2015-07-30pIRES2-DsRed2
2015-01-12pIRES2-AcGFP1
2015-07-26pIRES2-DsRed-Express2
2015-07-26plRES2-ZsGreen1
2015-01-22