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huvec細胞系培養步驟的分析

日期:2025-04-25 20:21
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摘要:
huvec細胞系培養步驟:

    1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。**天換液并檢查細胞密度。

    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

    2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

    3.輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

    4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

    PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或**柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右完全培養基混勻,放入培養箱過夜培養后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。

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