細胞名稱:	ExpiCHO-S
細胞又名:	ExpiCHO-S細胞, ExpiCHOS細胞, 懸浮CHO細胞，懸浮CHO-S細胞
種屬來源:	倉鼠
組織來源:	卵巢
疾病特征:	正常
細胞形態:	圓形
生長特性:	懸浮
培養基:	ExpiCHO Expression Medium 無血清細胞培養基（Gibco A29100）
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，8%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
細胞培養條件：	培養基：ExpiCHO培養基(Gibco A29100) 培養類型：懸浮培養 溫度范圍：37°C±5°C 震動器速度：對于口徑19毫米的培養瓶，設置搖床轉速為125±5轉/分。對于具有口徑25 mm的培養瓶，可以設置搖床震蕩速度為120±5rpm。 培養箱氣體：8%二氧化碳增濕體。同時，確保在搖床中的氣體流通和交換。
細胞接種密度：	預計收獲時間是轉染后3天：接種密度是0.2 × 106 –0.3 × 106 viable cells/mL 預計收獲時間是轉染后4天：接種密度是0.1 × 106 –0.2 × 106 viable cells/mL
培養瓶接種體積：	125ml細胞培養瓶：建議接種30-35ml培養基 250ml細胞培養瓶：建議接種60-70ml培養基 500ml細胞培養瓶：建議接種120-140ml培養基 125ml細胞培養瓶：建議接種240-260ml培養基4
ExpiCHO-S 細胞圖片：
ExpiCHO-S細胞說明：	在藥物開發過程中，從293細胞替換為CHO細胞可能會花費很多寶貴時間，并且帶來不確定性。 現在有了更佳方法。 Gibco ExpiCHO表達系統能夠達到瞬時系統的*高蛋白得率。 這意味著從研究開始，您就可以一直使用 CHO 細胞。 相較于其他瞬時表達系統，ExpiCHO表達系統可提供出色的克級蛋白產量，并為您節省寶貴時間、恒溫箱空間以及塑料器皿成本。  您可只使用一個培養瓶，來表達其他系統所用20或者更多培養瓶表達的蛋白量。 “ExpiCHO表達系統簡單易用，比使用 大腸桿菌表達蛋白方便許多。 系統的可擴展性非常棒。 我可以同時表達30種不同的單克隆抗體（mAbs），然后選擇我喜歡的一種擴大到克級。 ExpiCHO系統對我們來說是**性的救星。”   Arjen van den Berg博士，**科學家，細胞和分子醫學，加州大學圣地亞哥分校 ExpiCOH-S細胞來源于從CHO-S中國倉鼠卵巢細胞（CHO）中篩選和分離的亞克隆（1）。ExpiCHO-S細胞是懸浮表達細胞，在配套的ExpiCHO表達培養基中具有不成團，不聚集，并可以生長到非常高的細胞密度。與標準CHO、293和高密度Expi293F細胞相比，細胞通過瞬時轉染可以產生更高的蛋白質產量。   ExpiCHO-S細胞特點： •ExpiCHO-S細胞可以使目的蛋白表達獲得高達3g/L的產量 ·允許快速、高產量的瞬時蛋白質生產，允許實驗室開發蛋白質生物治療劑在藥物開發過程中從CHO表達的蛋白質開始到完成.   •能夠在ExpCHO-S表達培養基中的高密度懸浮生長 •倍增時間短，17小時的快速倍增時間 •解凍后，20代內，ExpiCHO-S細胞都能獲得一致的瞬時表達能力 •在轉染后10天內保持細胞的高活力和高生產力   ExpiCHO-S細胞通常生長在加濕的二氧化碳細胞培養箱中的搖瓶平臺上的燒瓶中。然而，培養基體積可從多孔板中的1L，直到搖瓶10 L培養基體積，都可以。根據表達的蛋白質和ExpiCHO-S細胞狀態，可以在轉染后5-14天進行蛋白質收獲。
ExpiCHO-S細胞說明書：	ExpiCHO-S細胞說明書 ExpiCHO-S細胞培養方法

ExpiCHO-S細胞特點和簡介

ExpiCHO-S細胞轉染實驗方案

ExpiCHO-S細胞實驗流程圖

ExpiCHO-S細胞蛋白表達產量

圖1：ExpiCHO-S細胞與其他CHO細胞蛋白表達產量對比。人IgG在ExpiCHO-S細胞中表達產量高達3g/L以上，是CHO細胞表達產量的160倍； 促紅細胞生成素（EPO）在ExpiCHO-S細胞中表達產量是0.5g/L， 該產量是CHO細胞的25倍；兔IgG在ExpiCHO-S細胞中表達產量是0.4mg/L, 是CHO細胞表達水平的95倍。

與Expi293相比，在ExpiCHO-S表達系統中，IgG或者其他蛋白的產量提高了0.6-97倍。


下圖是人源抗體在Expi293與ExpiCHO-S細胞中的表達水平比較。

蛋白質	Expi293或當前系統(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
人源抗體	26.6	2,580	97
	4	147	33
	4	56	14.6
	22	266	12.4
	48	334	6.9
	36	190	5.3
	18	78	4.3
	85	314	3.7
	170	410	2.4
	138	325	2.4
	25	50	2.0
	102	204	2.0
	57	92	1.6
	336	491	1.5
	565	864	1.5
	450	600	1.3
	350	450	1.3
	309	383	1.2
	243	276	1.1
	352	371	1.1
	565	620	1.1
	309	302	1.0
	139	129	0.9
	11	9	0.8
	565	365	0.6
	檢測不到	500
	沉淀	330

下圖是兔源抗體和鼠源抗體在Expi293與ExpiCHO-S細胞中的表達水平比較。

蛋白質	Expi293或當前系統(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
兔源抗體	5	120	20
	17	178	11
鼠源抗體	216	1,412	6.5
	20	86	4.3
	60	240	4.0
	60	240	4.0
	76	196	2.6
	12	18	1.5
	16	17	1.1
	119	48	0.4
	135	47	0.3

下圖是其他抗體在Expi293與ExpiCHO-S細胞中的表達水平比較。

蛋白質	Expi293或當前系統(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
鉍碲	免疫印跡	免疫印跡	25
雙特異性抗體	28	117	4.2
	26	90	3.5
	126	250	2.0
	NA	763
	NA	660
分泌	216	1412	6.5

下圖是非抗體蛋白在Expi293與ExpiCHO-S細胞中的表達水平比較。

蛋白質	Expi293或當前系統(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
非抗體	15	82	5.5
	免疫印跡	免疫印跡	5.0
	164	68	0.4
	NA	206
Fab	85	366	4.3
	10	10	1.0
FC融合蛋白	5	8	1.7
His標簽的人白細胞抗原	檢測不到	12	12
病毒蛋白	免疫印跡	免疫印跡	3–5
細胞因子	免疫印跡	免疫印跡	5-10
FcR	免疫印跡	免疫印跡	2-3

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細胞接受后處理

1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養基，添加 6ml本公司附帶的完全培養基。

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。

 5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
 

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細胞培養操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      
   
     1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

ExpiCHO-S懸浮CHO-S細胞培養注意事項

 1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
 
 2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

 4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

 6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 Procell 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細胞僅供科研使用。

125ml細胞培養瓶：建議接種30-35ml培養基