出品公司:	ATCC
細胞名稱:	PA317細胞, ATCC CRL-9078細胞, pA317細胞, 小鼠成纖維細胞
細胞又名:	pA317
存儲人:	Fred Hutchinson Cancer Res. Cntr.
種屬來源:	小鼠
組織來源:	胚胎
疾病特征:	正常
細胞形態:	成纖維細胞樣
生長特性:	貼壁生長
培養基:	DMEM培養基，90%；FBS，10%。
產品目錄號:	CRL-9078
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
**等級:	1
參考文獻:	Miller AD, Buttimore C. Redesign of retrovirus packaging cell lines to avoid recombination leading to helper virus production. Mol. Cell. Biol. 6: 2895-2902, 1986. PubMed: 3785217   Miller AD. DNA contructs for retrovirus packaging cell lines. US Patent 4,861,719 dated Aug 29 1989   Rosenberg SA, et al. Gene transfer into humans--immunotherapy of patients with advanced melanoma, using tumor-infiltrating lymphocytes modified by retroviral gene transduction. N. Engl. J. Med. 323: 570-578, 1990. PubMed: 2381442
細胞圖片：

PA317細胞ATCC CRL-9078小鼠成纖維細胞特點和簡介

PA317細胞株源自TK- NIH/3T3細胞，通過pBR322中的包裝結構DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉染構建而成。 通過感染或轉染將逆轉錄病毒載體導入這些細胞，結果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因導入人類。 可能因為用于構建這株細胞而轉入的DNA丟失，能夠包裝逆轉錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。 選擇后，細胞應在HT培養基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。

PA317細胞ATCC CRL-9078小鼠成纖維細胞接受后處理

1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養基，添加 6ml本公司附帶的完全培養基。

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。

 5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
 

PA317細胞ATCC CRL-9078小鼠成纖維細胞培養操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      
   
     1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

PA317細胞ATCC CRL-9078小鼠成纖維細胞培養注意事項

 1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
 
 2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

 4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

 6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 Procell 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細胞僅供科研使用。