出品公司:	ATCC
細胞名稱:	THLE-3細胞, ATCC CRL-11233細胞, THLE3細胞, 人肝永生化細胞
細胞又名:	Transformed Human Liver Epithelial-3
存儲人:	National Cancer Institute
種屬來源:	人
組織來源:	肝臟
疾病特征:	正常
細胞形態:	上皮細胞樣
生長特性:	貼壁生長
培養基:	MEM培養基(MEM，GIBCO，貨號41500034)，90%；FBS，10%。
產品目錄號:	CRL-11233
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
**等級:	2
STR:	Amelogenin: X CSF1PO: 11,12 D13S317: 13 D16S539: 11,12 D5S818: 13 D7S820: 8,10 THO1: 8,9.3 TPOX: 6,9 vWA: 17,18
參考文獻:	Harris CC, et al. Human liver epithelial cells. US Patent 5,759,765 dated Jun 2 1998   Pfeifer AM, et al. Simian virus 40 large tumor antigen-immortalized normal human liver epithelial cells express hepatocyte characteristics and metabolize chemical carcinogens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5123-5127, 1993. PubMed: 7685115   Pfeifer AM, et al. Simian virus 40 large tumor antigen-immortalized normal human liver epithelial cells express hepatocyte characteristics and metabolize chemical carcinogens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5123-5127, 1993. PubMed: 7685115
細胞圖片：

THLE-3細胞ATCC CRL-11233人肝永生化細胞特點和簡介

THLE-2 (ATCC CRL-10149 和 THLE-3 (ATCC CRL-11233)細胞系是正常肝細胞用SV40大T抗原轉染得到。 將含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆轉錄病毒載體導入兼嗜性包裝細胞株PA317中生產病毒。 THLE-2 and THLE-3表達正常**肝上皮細胞特征性的表型。 當注射到無胸腺裸鼠中時，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達甲胎蛋白。 THLE-2 and THLE-3將benzo[a]pyrene, N-nitrosodimethylamine, 和 aflatoxin B1代謝成附著于DNA的*終成瘤代謝物，從而揭示細胞色素P450途徑的發揮作用。 THLE也保留了其他與化學致瘤物代謝相關的酶，比如epoxide hydrolase, NADPH cytochrome P450 reductase, superoxide dismutase, catalase, glutathione S-transferases, and glutathione peroxidase 這些永生化人肝細胞構成了研究藥物毒理學和人肝細胞癌的病原學及病理的體外模型。 1993年一月提交到ATCC的培養物污染了支原體。 其后代用去支原體試劑進行處理21天。 處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測。 結果都呈陰性。

THLE-3細胞ATCC CRL-11233人肝永生化細胞接受后處理

1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養基，添加 6ml本公司附帶的完全培養基。

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。

 5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
 

THLE-3細胞ATCC CRL-11233人肝永生化細胞培養操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      
   
     1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

THLE-3細胞ATCC CRL-11233人肝永生化細胞培養注意事項

 1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
 
 2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

 4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

 6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 Procell 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細胞僅供科研使用。